PolyPlus jetCRISPR產(chǎn)品
| 試劑 | jetCRISPR™ |
|---|---|
| 分子交付 | 核糖核蛋白：指導(dǎo)RNA和Cas蛋白（Cas9，Cpf1） |
| 應(yīng)用 | CRISPR介導(dǎo)的基因組編輯 |
| 細(xì)胞類型 | 貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞 |
| 轉(zhuǎn)染數(shù) | 1.5 ml jetCRISPR™轉(zhuǎn)染試劑足以在24孔板中進(jìn)行1250次轉(zhuǎn)染，或在6孔板中進(jìn)行300次轉(zhuǎn)染 |
| 存儲(chǔ) | 5°C±3°C，適當(dāng)存放可穩(wěn)定6個(gè)月（502-01）至至少一年（其他包裝尺寸） |
CRISPR / Cas工程核酸酶系統(tǒng)是功能強(qiáng)大且高度特異性的基因組編輯工具。CRISPR / Cas是具有指導(dǎo)RNA（gRNA）分子的兩組分系統(tǒng)，該分子驅(qū)動(dòng)Cas核酸酶（Cas9，Cpf1）到基因組內(nèi)的特定目標(biāo)序列，以引入遺傳修飾（突變，插入或缺失）。
jetCRISPR™是一種創(chuàng)新試劑，專門設(shè)計(jì)用于在CRISPR / Cas9和CRISPR / Cpf1實(shí)驗(yàn)中提供RNP。jetCRISPR™帶來(lái)了很高的CRISPR基因組編輯效率，同時(shí)保持了出色的細(xì)胞活力和轉(zhuǎn)染后的形態(tài)。使用先進(jìn)的技術(shù)進(jìn)行CRISPR / Cas9和CRISPR / Cpf1 RNP遞送！
| 產(chǎn)品 | 參考編號(hào) | 產(chǎn)品尺寸 |
|---|---|---|
| jetCRISPR™ | 502-01 | 0.1毫升 |
| jetCRISPR™ | 502-07 | 0.75毫升 |
| SpCas9核酸酶 | 722-100 | 100微克 |
1.5 ml jetCRISPR™轉(zhuǎn)染試劑足以執(zhí)行約 在6孔板中進(jìn)行300次轉(zhuǎn)染。
jetCRISPR™是專為RNP（指導(dǎo)RNA和Cas9蛋白復(fù)合物）的高轉(zhuǎn)染效率而設(shè)計(jì)的，因此可在不同細(xì)胞類型中的多種靶標(biāo)上實(shí)現(xiàn)cas9介導(dǎo)的高基因組編輯效率（圖1和2）。
圖1：在HeLa細(xì)胞中使用jetCRISPR™實(shí)現(xiàn)高基因組編輯效率。在96孔板的每孔中，使用幾種RNP濃度的SpCas9核酸酶和HPRT1 sgRNA或陰性對(duì)照與0.3 µl jetCRISPR™試劑結(jié)合在HeLa細(xì)胞中進(jìn)行RNP轉(zhuǎn)染。在48小時(shí)后轉(zhuǎn)染，T7消化產(chǎn)物在2％瓊脂糖凝膠上運(yùn)行，并與由G顯示BET染色：箱透（Syngene公司®）。收購(gòu)均與Genesnap軟件進(jìn)行（Syngene公司®）和INDEL的量化用的Genetools軟件（Syngene公司執(zhí)行®）。1：1083 bp的未切割片段； 2：827 bp的長(zhǎng)切割片段； 3：256 bp的短切割片段。
jetCRISPR™轉(zhuǎn)染試劑的基因編輯效率比其他競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手更高，這使其成為CRISPR應(yīng)用的優(yōu)選產(chǎn)品。
圖2：在用陽(yáng)離子脂質(zhì)體比較jetCRISPR™獲得了優(yōu)異的基因組編輯效率® CRISPRMAX™。RNP轉(zhuǎn)染的A549和用30nM的RNP（SpCas9核酸酶和HPRT1因組）與jetCRISPR™試劑的0.3微升或0.3微升的Lipofectamine HEK-293細(xì)胞中進(jìn)行® CRISPRMAX™，每一個(gè)96孔板的孔。轉(zhuǎn)染后48小時(shí)，通過(guò)使用T7核酸內(nèi)切酶方法計(jì)算INDEL的百分比（％）來(lái)評(píng)估基因組編輯。該INDEL％是通過(guò)使用Genetools軟件（Syngene公司確定®）。
在Polyplus-transfection中，我們很自豪能使用對(duì)細(xì)胞極為溫和的試劑，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保持出色的細(xì)胞活力和形態(tài)。jetCRISPR™與血清和抗生素均兼容，因此可以在健康細(xì)胞的宜條件下進(jìn)行RNP轉(zhuǎn)染（圖3）。
圖3：jetCRISPR™轉(zhuǎn)染后48小時(shí)的細(xì)胞活力和形態(tài)極棒。使用30 nM RNP（SpCas9核酸酶和HPRT1 sgRNA）在96孔板的每孔中用0.3 µl jetCRISPR™試劑對(duì)HEK-293和A549細(xì)胞進(jìn)行RNP轉(zhuǎn)染。在48小時(shí)后轉(zhuǎn)染，細(xì)胞形態(tài)由相襯ZOE熒光細(xì)胞成像可視化（BIORAD ®）。
直接將Cas9作為蛋白質(zhì)而不是質(zhì)粒進(jìn)行傳遞，可以輕松進(jìn)行基因組編輯，因?yàn)樵摰鞍踪|(zhì)易于使用。使用jetCRISPR™傳遞Cas9蛋白和gRNA可以實(shí)現(xiàn)快速可靠的基因編輯（圖4）。此外，Cas9蛋白從細(xì)胞中清除的速度將比質(zhì)粒更快，因此可將脫靶效應(yīng)降至低，并實(shí)現(xiàn)更具體的基因組編輯（Kim S等人；Genome Research 2014； 24：1012-1019）。
圖4：用jetCRISPR™獲得的HEK-293細(xì)胞快速，可靠的基因編輯效率。使用30 nM RNP（Cas9蛋白和HPRT1 sgRNA）在96孔板中每孔加0.3μljetCRISPR™試劑在HEK-293細(xì)胞中進(jìn)行RNP轉(zhuǎn)染。通過(guò)使用T7核酸內(nèi)切酶方法計(jì)算INDEL的百分比（％），可以在不同時(shí)間點(diǎn)評(píng)估基因組編輯。該INDEL％是通過(guò)使用Genetools軟件（Syngene公司確定®）。
jetCRISPR™是作為即用型解決方案提供的?，F(xiàn)在，轉(zhuǎn)染RNP是一個(gè)非常簡(jiǎn)單的過(guò)程，只需幾個(gè)步驟：形成RNP復(fù)合物，添加轉(zhuǎn)染試劑并添加到孔中！
反向轉(zhuǎn)染和正向轉(zhuǎn)染都非常適合與jetCRISPR™一起使用，因此使您可以調(diào)整方案以適合您正在處理的細(xì)胞，板的形式以及分析時(shí)間。通過(guò)使用反向協(xié)議（圖5），數(shù)據(jù)將比使用正向協(xié)議的日期早一天。
圖5：jetCRISPR™反向方案
技術(shù)支持專家Alengo Nyamay'antu（PhD）介紹了基因組編輯中的轉(zhuǎn)染趨勢(shì)。她概述了將引導(dǎo)RNA和Cas9核酸酶同時(shí)傳遞到細(xì)胞中的解決方案。
