biostatus DRAQ5說(shuō)明書(shū)
DRAQ5™
DRAQ5™
適用于: FM , Flow Cyt , ICC/IF
DRAQ5™ 是一種細(xì)胞通透性的遠(yuǎn)紅色熒光DNA染料，可與GFP或FITC等常用標(biāo)記結(jié)合用于固定或非固定/活細(xì)胞。
與任何細(xì)胞滲透性DNA插入探針一樣，DRAQ5可能在長(zhǎng)期檢測(cè)中抑制細(xì)胞分裂，并應(yīng)進(jìn)行任何效果測(cè)試。
DRAQ5染色可用于流式細(xì)胞術(shù)、活細(xì)胞成像和細(xì)胞分析，該染色劑與許多儀器平臺(tái)的標(biāo)準(zhǔn)協(xié)議高度兼容。
DRAQ5的化學(xué)名稱(chēng)為1，5-雙-4，8-二羥基蒽-9，10-二酮。
DRAQ5染色的優(yōu)點(diǎn)包括
-方便易用的水溶液
-快速進(jìn)入活細(xì)胞，提供高水平的核歧視
-無(wú)光漂白效應(yīng)
-可用于大多數(shù)細(xì)胞類(lèi)型，真核和原核：哺乳動(dòng)物，細(xì)菌，寄生蟲(chóng)，植物等。
-流式細(xì)胞術(shù)中常用FITC/GFP+PE組合無(wú)需補(bǔ)償
-無(wú)需RNase處理
-DNA結(jié)合無(wú)熒光增強(qiáng)
-與臺(tái)式流式、激光掃描細(xì)胞儀、非紫外激光掃描和基于燈的共焦顯微鏡光學(xué)兼容
光譜特性：
激勵(lì)
647nm線(xiàn)宜（Ex大646nm）
488、514、568和633納米線(xiàn)，次優(yōu)
雙光子激發(fā)（1047nm）和激發(fā)暗（700-850nm）
排放（取決于儀器）：
-665nm至紅外線(xiàn)大681nm/697nm與dsDNA插層）
-與可見(jiàn)光范圍（如GFP和FITC）的小重疊
-Em.過(guò)濾器可包括695L、715LP或780 LP
濃度：5mm
Liquid
Store at +4°C. Do Not Freeze. Store In the Dark.
濃度
應(yīng)用說(shuō)明包括推薦的起始稀釋液；宜稀釋液/濃度應(yīng)由終用戶(hù)確定。
阿伯
在分析濃度下使用FM。
流量循環(huán)1/1000-1/250。對(duì)于有核細(xì)胞的選通=5μM；對(duì)于細(xì)胞周期分析=20μM
商會(huì)/單項(xiàng)體育聯(lián)合會(huì)1/1000。對(duì)于基于細(xì)胞的分析、免疫熒光顯微鏡和細(xì)胞內(nèi)WB=5μM
強(qiáng)烈建議每個(gè)研究者仔細(xì)確定濃度和標(biāo)記條件，以便在感興趣的分析中獲得宜性能。有關(guān)應(yīng)用程序的更多具體信息，請(qǐng)參閱協(xié)議手冊(cè)部分。
Immunocytochemistry/ Immunofluorescence - DRAQ5™
用層粘連蛋白B1抗體核膜標(biāo)記（ab16048）和α-微管蛋白抗體（DM1A）負(fù)載對(duì)照（ab7291）對(duì)HeLa細(xì)胞進(jìn)行染色。細(xì)胞100%甲醇固定（5min），然后在1%牛血清白蛋白中孵育0.1%PBS吐溫1h，使細(xì)胞通透性增強(qiáng)，阻斷非特異性蛋白-蛋白質(zhì)相互作用。然后在4C下用一級(jí)抗體（ab16048和ab7291）以1μg/ml孵育細(xì)胞。二級(jí)抗體是山羊?qū)ν肐gG-H&L的二級(jí)抗體（DyLight®488）、預(yù)吸附抗體（ab96899）（綠色）和山羊?qū)π∈驣gG-H&L的二級(jí)抗體（DyLight®594）、預(yù)吸附抗體（ab96881）（紅色）室溫下1/250稀釋1h。將5μM DRAQ5加入二級(jí)抗體混合物中以標(biāo)記細(xì)胞核DNA（假紫色）。
Immunocytochemistry/ Immunofluorescence - DRAQ5™ (ab108410)
用β-連環(huán)蛋白抗體（ab16051）和α-微管蛋白抗體[DM1A]負(fù)載對(duì)照（ab7291）對(duì)HeLa細(xì)胞進(jìn)行染色。細(xì)胞經(jīng)100%甲醇固定（5min），然后在1%BSA和0.1%PBS-Tween中孵育1h，使細(xì)胞通透性增強(qiáng)，阻斷非特異性蛋白-蛋白質(zhì)相互作用。然后用一級(jí)抗體（ab16051和ab7921）以1微克/毫升的濃度在4C下孵育細(xì)胞，二級(jí)抗體為山羊?qū)ν肐gG-H&L的多克隆二級(jí)抗體（DyLight®488）、預(yù)吸附（ab96899）（綠色）和山羊?qū)ν肐gG-H&L的多克隆二級(jí)抗體（DyLight®594）、預(yù)吸附（ab96899）（紅色）在室溫下稀釋1/250小時(shí)。將5μM DRAQ5添加到二級(jí)抗體混合物中以標(biāo)記細(xì)胞核DNA（假橙色）。
Immunocytochemistry/ Immunofluorescence - DRAQ5™ (ab108410)
