ALSTEM是一家位于灣區(qū)的早期生物技術(shù)公司，擁有快速擴展的產(chǎn)品和服務組合，為生物制藥和學術(shù)機構(gòu)提供服務。受到加利福尼亞干細胞研究承諾的啟發(fā)，ALSTEM于2012年由具有iPS細胞重編程和基因組編輯技術(shù)專業(yè)知識的科學家創(chuàng)立。
ALSTEM VP200說明書
Retroviral Packaging Mix: #VP200
描述
逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物提供了一種快速方便的方法，用于產(chǎn)生高滴度的無復制能力的逆轉(zhuǎn)錄病毒。這種基于Moloney鼠白血病病毒（MMLV）的包裝系統(tǒng)擁有您的靶細胞所需的理想宿主范圍。它是一種即用型逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物，含有VSVG，僅需48小時即可產(chǎn)生高滴度的逆轉(zhuǎn)錄病毒。這些必需的病毒結(jié)構(gòu)基因的單獨表達通過小化細胞分裂過程中產(chǎn)生的風險并降低產(chǎn)生具有復制能力的病毒的機會來確保對重組構(gòu)建體的安全性和控制。
產(chǎn)品規(guī)格 | |
產(chǎn)品名稱 | 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物 |
目錄 ＃ | VP200 |
尺寸 | 200μl |
運輸 | 環(huán)境溫度 |
儲存和穩(wěn)定性 | 儲存在-20°C。根據(jù)指示儲存，本產(chǎn)品可穩(wěn)定保存6個月。應通過分成一次性等分試樣來小化凍融循環(huán)。將等分試樣儲存在-20°C冰箱中直至準備使用。 |
質(zhì)量控制 | 每批逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物在使用人胚胎腎293細胞的轉(zhuǎn)染測定中進行功能測試。 |
安全須知 | 對于含有BSL-2生物的所有材料，請遵循推薦的NIH指南。始終戴上手套，使用過濾的吸頭并在生物安全罩下工作。 |
限制使用 | 僅供研究使用。不得用于診斷或治療程序。 |
用法 | 對于10厘米的逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝，將7.5微克逆轉(zhuǎn)錄病毒表達載體與15微升逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物混合 |
協(xié)議 | 下載 |
逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物是用于產(chǎn)生高滴度泛熱反轉(zhuǎn)錄病毒的優(yōu)化配方。
條件 | 數(shù)量 |
組織培養(yǎng)板大小 | 10厘米（每個慢病毒載體一個） |
要轉(zhuǎn)染的293T細胞數(shù) | 4×10 6個細胞 |
逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物的量 | 15μl |
pRetro表達載體的量 | 7.5微克 |
NanoFect的數(shù)量（Cat.no. NF100） | 45μl |
無血清DMEM的量 | 500μl |
第1天：
1.在10cm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)293T細胞（每10cm培養(yǎng)皿約4×10 6個細胞）。
第2天：
2.檢查以確保細胞達到70-80％匯合。
3.對于每個10cm培養(yǎng)皿，準備轉(zhuǎn)染復合物如下：
一個。1.5ml試管A：在0.5ml無血清培養(yǎng)基（例如DMEM）中稀釋7.5μgDNA質(zhì)粒和15μl逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物。通過移液混合。
灣 1.5ml離心管中B：稀釋NanoFect的45μL TM轉(zhuǎn)染試劑在0.5ml無血清培養(yǎng)基中并輕輕混合。
C。將NanoFect / DMEM添加到DNA / DMEM溶液中。通過渦旋混合5-10秒，然后在室溫下孵育DMEM-質(zhì)粒-NanoFect混合物15分鐘。
4.將來自步驟3的完整轉(zhuǎn)染復合物逐滴添加至細胞，并旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿以將轉(zhuǎn)染復合物均勻地分散在平板中。
5.將板在37°C孵育過夜。
第3天：
6.用10ml新鮮培養(yǎng)基更換上清液。
注意：您可以用20μlTiterMax（500X，ALSTEM，目錄號VB100）補充培養(yǎng)基，以提高病毒滴度。
7.在37°C孵育24小時。
第4天（1 ST收獲）：
8.將含有逆轉(zhuǎn)錄病毒的上清液收集到50ml無菌帶蓋的錐形離心管中。
9.在4℃下以3000rpm離心上清液15分鐘以沉淀細胞碎片。
10.通過低蛋白結(jié)合0.45-μm無菌過濾器過濾澄清的上清液。
11.病毒已準備好進行感染，純化，或者可以在-80°C下作為病毒原液儲存，以備將來使用。等分體積優(yōu)選用于儲存以降低凍融循環(huán)中的病毒滴度損失。
12.如果需要第二次收獲，在次收獲后向細胞中加入10ml*培養(yǎng)基，并將培養(yǎng)皿放回37℃培養(yǎng)箱中。
注意：您可以用20μlTiterMax（500X，ALSTEM，目錄號VB100）補充培養(yǎng)基，以提高病毒滴度。
第5天（第二次收獲）
13.第二次收獲可在第5天完成，步驟8-11之后。
14.為了濃縮病毒，將1體積的逆轉(zhuǎn)錄病毒濃縮溶液（ALSTEM，cat.no.VC200）加入到4體積的病毒上清液中，并充分混合。
15.將混合物置于4°C冰箱中過夜，第二天將病毒沉淀。有關(guān)詳細信息，請參閱用戶手冊。
| 貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
| VB100 | ViralBoost | 1毫升 | alstembio |
| VC100 | 慢病毒沉淀解決方案 | 100毫升/ 250毫升/ 500毫升 | alstembio |
| V020 | TransPlus™病毒轉(zhuǎn)導增強劑 | 100μl/500μl | alstembio |
| CILV02 | hTERT細胞永生化試劑盒 | 5 x20μl | alstembio |
| VC200 | 逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀解決方案 | 100毫升/ 250毫升/ 500毫升 | alstembio |
| VP100 | 慢病毒包裝混合物 | 200μl | alstembio |
| VP200 | 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物 | 200μl | alstembio |
上海起發(fā)實驗試劑有限公司是實驗試劑一站式采購服務商
1：強大的進口輻射能力，血清、抗體、耗材、大部分限制進口品等。
2：產(chǎn)品種類齊全，經(jīng)營超過700多品牌，基本涵蓋所有生物實驗試劑耗材。
3：提供加急服務，貨品一般1-2周到貨。
4：富有競爭良好的信譽，大部分客戶提供貨到付款服務?？蛻舭ㄇ迦A、北大、交大、復旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、國藥、fisher等知藥企。
6：我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等幾十家國外公司授權(quán)代理。
7：我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發(fā)，歡迎合作。
