ALSTEM是一家位于灣區(qū)的早期生物技術(shù)公司，擁有快速擴展的產(chǎn)品和服務(wù)組合，為生物制藥和學(xué)術(shù)機構(gòu)提供服務(wù)。受到加利福尼亞干細胞研究承諾的啟發(fā)，ALSTEM于2012年由具有iPS細胞重編程和基因組編輯技術(shù)專業(yè)知識的科學(xué)家創(chuàng)立。
產(chǎn)品描述
NanoFect Transfection Reagent是一種*的聚合物混合物，與的脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑盒相比，可以更低的成本向細胞提供更多的DNA和siRNA。NanoFect™是一種功能強大，適用范圍廣泛的轉(zhuǎn)染試劑，可有效，可重復(fù)轉(zhuǎn)染。
產(chǎn)品規(guī)格 | |
產(chǎn)品名稱 | NanoFect轉(zhuǎn)染試劑 |
目錄 ＃ | NF100 |
尺寸 | 1毫升 |
運輸 | 環(huán)境溫度 |
儲存和穩(wěn)定性 | 儲存在4°C。根據(jù)指示儲存，本產(chǎn)品可穩(wěn)定保存6個月。 |
質(zhì)量控制 | 每批NanoFect™轉(zhuǎn)染試劑均在人胚胎腎293細胞的轉(zhuǎn)染試驗中進行功能測試。 |
限制使用 | 僅供研究使用。不得用于診斷或治療程序。 |
協(xié)議 | 下載 |
NanoFect試劑在DNA和RNA存在下自組裝納米顆粒。這些復(fù)合物很容易被靶細胞吸收，從而有效地進行基因遞送。由于NanoFect在抗生素和血清存在下起作用，因此無需更換培養(yǎng)基。這種易于使用的方案，在直接添加到靶細胞之前快速一步孵育15分鐘，使NanoFect非常適合高通量轉(zhuǎn)染實驗。
為了高轉(zhuǎn)染效率和低毒性，以高密度轉(zhuǎn)染細胞。建議使用50-80％的融合度。
細胞應(yīng)在轉(zhuǎn)染前18至24小時接種，以使細胞密度在轉(zhuǎn)染時達到50~80％匯合。在轉(zhuǎn)染前2小時，向每個孔中新鮮加入含有血清和抗生素的*培養(yǎng)基。
以下方案用于在24孔板中轉(zhuǎn)染，參見表1用于其他培養(yǎng)形式的轉(zhuǎn)染。
1.對于每個孔，在轉(zhuǎn)染前2小時新鮮加入0.5ml正常生長培養(yǎng)基（抗生素不影響結(jié)果）。
2.對于每個孔，在50μl不含血清的DMEM中稀釋0.5μgDNA，并輕輕混合。
3.將1μlNanoFect試劑加入另一個含有50μl不含血清的DMEM的試管中，輕輕混勻。
4.將NanoFect / DMEM添加到DNA / DMEM溶液中。通過渦旋混合5-10秒。
5.在室溫下孵育約15分鐘，以使NanoFect / DNA復(fù)合物自組裝。
6.將100μlNanoFect/ DNA混合物逐滴添加到每個孔中的細胞中，并通過輕輕旋轉(zhuǎn)平板使其均質(zhì)化。
7.將平板放回細胞培養(yǎng)箱中。
8.轉(zhuǎn)染后24至48小時檢查轉(zhuǎn)染效率。
表1.不同文化的推薦量
文化菜表面 | 面積（cm 2） | 細胞數(shù)量 | 中等體積（ml） | 質(zhì)粒（微克） | NanoFect（μl） | 稀釋劑體積（μl） |
96孔 | 0.3 | 1-1.5x104 | 0.1 | 0.1 | 0.3 | 10 |
48孔 | 1 | 2.5-5x104 | 0.25 | 0.25 | 0.75 | 20 |
24孔 | 2 | 0.5-1x105 | 0.5 | 0.5 | 1.5 | 50 |
12孔 | 4 | 1-2x10 5 | 1 | 1 | 3 | 100 |
6孔/ 35毫米 | 9.5 | 2-4x10 5 | 2 | 2.5 | 7.5 | 200 |
60毫米/ T25 | 28 | 5-10x105 | 五 | 6-8 | 15-24 | 300 |
100毫米/ T75 | 79 | 1.5-3x106 | 10 | 15-20 | 40-60 | 500 |
150毫米/ T150 | 153 | 5-9x10 6 | 20 | 25-40 | 65-120 | 1000 |
注意：對于不同的細胞類型，NanoFect（μL）：DNA（μg）的適合比例約為3：1。我們建議將NanoFect（μL）：DNA（μg）比例為2：1作為起點，通?？梢蕴峁┝钊藵M意的轉(zhuǎn)染效率和不可見的細胞毒性，但NanoFect的量可以從2到4μl/μgDNA調(diào)整，具體取決于要轉(zhuǎn)染的細胞系。為確保NanoFect / DNA復(fù)合物顆粒的宜尺寸，我們建議使用含有高葡萄糖的無血清DMEM稀釋DNA和NanoFect Reagent。
| 貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
| VB100 | ViralBoost | 1毫升 | alstembio |
| VC100 | 慢病毒沉淀解決方案 | 100毫升/ 250毫升/ 500毫升 | alstembio |
| V020 | TransPlus™病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強劑 | 100μl/500μl | alstembio |
| CILV02 | hTERT細胞永生化試劑盒 | 5 x20μl | alstembio |
| VC200 | 逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀解決方案 | 100毫升/ 250毫升/ 500毫升 | alstembio |
| VP100 | 慢病毒包裝混合物 | 200μl | alstembio |
| VP200 | 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝混合物 | 200μl | alstembio |
| NF100 | NanoFect轉(zhuǎn)染試劑 | 1毫升 | alstembio |
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