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一瓶蛋白質組穩(wěn)定劑。體積足以穩(wěn)定一百五十五毫升全血樣本。還包括解凍在穩(wěn)定劑中冷凍保存的樣品后使用的緩沖液：THAWLYSE1“Thaw-Lyse，1000X Concentrate”。
所需緩沖區(qū)：
1倍水樣(用蒸餾水稀釋1000倍濃縮液，使工作濃度達到1倍)。
緩沖液應在室溫染色緩沖液(即。磷酸鹽緩沖液0.5%牛血清白蛋白)緩沖液應在4℃
可能需要的其他緩沖區(qū)：
1倍緩沖液2(用蒸餾水稀釋5倍濃縮液，使工作濃度達到1倍)。緩沖器應在室溫下。
禮儀:
如果樣品沒有凍結，因為分析將在同一天進行，請繼續(xù)進行第二步。在冷水浴(10°C至15°C)中用攪拌水(即.=‘class 1’>)解凍冷凍樣品.旋轉磁性 攪拌棒或使用軌道震動器)大約20分鐘，直到樣品*解凍。另一種方法是，在4°C冰箱的開式機架中解凍管子大約30分鐘，直到 樣品是*解凍的，不要使用泡沫塑料機架來保存樣品，因為樣品要從-80°C快速過渡到*解凍狀態(tài)是很重要的。一旦樣品迅速解凍，m 敬下一步。
2.加入1倍的SAW-Lyse緩沖液，比例為4：1的穩(wěn)定樣品(即。如果原始樣本為全血1ml，則加入1.4ml穩(wěn)定劑，總體積為2。 穩(wěn)定后.4ml；在此基礎上加入至少9.6ml的1xThaw-Lyse緩沖液)。將樣品在室溫下攪拌10分鐘。
3.600×g離心，室溫下離心5分鐘，取白細胞。扔掉上清液。
4.將球團置于25 ml的1倍Saw-Lyse緩沖液中，室溫下孵育10分鐘。在室溫下，以600×g離心5分鐘。丟棄上清液。 如果球團是相對白色的，紅細胞溶解是*的。
紅細胞溶解完成后，樣品再懸浮在染色介質中，轉移到FACS管或板上，用染色介質沖洗。將樣品按600 x g離心5次 幾分鐘?，F(xiàn)在可以像用多聚甲醛固定的白細胞一樣對樣品進行染色，使用固定細胞標準染色規(guī)程。注意進行細胞內(nèi)染色 細胞必須用酒精滲透。90%甲醇)或洗滌劑(即。0.2%的皂甙)作為智能管道系統(tǒng)，就像傳統(tǒng)的固定方法一樣，產(chǎn)生細胞膜為s的細胞 可滲透于小分子染料，如碘化丙酸丙酯，但在其他方面是完整的，不提供適當?shù)目贵w進入細胞內(nèi)部，而不經(jīng)alc進一步滲透。 乙醇或洗滌劑
Lotus公司出品的群件系列軟件
建議在一項研究中對用于解凍樣品的條件(水浴溫度、攪拌和持續(xù)時間)進行標準化。
完整的紅細胞溶解通常是在步驟4之后實現(xiàn)的。室溫下穩(wěn)定時間較長或樣品在4°C(或更高溫度)保溫時間較長 皺縮可能會使紅細胞溶解更加困難。
如果紅細胞溶解在步驟4后未完成，請執(zhí)行以下步驟：
A1.將球粒置于大于15 ml的1xLyse緩沖液中，在室溫下孵育10分鐘，與原藥丸相同，丟棄上清液。如果球團是白色的，表示紅細胞溶解。 完成后，繼續(xù)上面的步驟5。如果沒有，請繼續(xù)下面的步驟A2。
A2.將球團置于大于15 ml的1倍Saw-Lyse緩沖液中，在室溫下孵育10分鐘，與以前相同，丟棄上清液。球團應該是相對白色的，表示紅細胞溶解。 S是完整的。繼續(xù)執(zhí)行上面的步驟5
貨號 | 原貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 價格 | 品牌 |
PBS05 | NC0334362 | Smart Tube Base Station, Standard Model | ea | 195500 | smarttube2019 |
PROT1 | NC0500838 | Proteomic Stabilizer PROT1, size: 100 Tests | 100 Tests | 8500 | smarttube2019 |
MTS1P | NC0618265 | Smart Tubes, case of 100 | case of 100 | 37400 | smarttube2019 |
PROT1-1L | NC0618275 | Proteomic Stabilizer PROT1, size: 1 Liter | 1 Liter | 38998 | smarttube2019 |
PROT1-250ML | NC0627333 | Proteomic Stabilizer PROT1, size: 250 milliliters | 250 milliliters | 30345 | smarttube2019 |
STBLSTORE2-1000 | NC1028710 | Stable-Store V2 Buffer, size: 1000 ML | 1000 ML | 5100 | smarttube2019 |
STBLYSE2-250 | NC1028711 | Stable-Lyse V2 Buffer, size: 250 ML | 250 ML | 7140 | smarttube2019 |
PROGRAM1P | NC1228060 | Programming Station for Smart Tube Base Station | ea | 8500 | smarttube2019 |
THAWLYSE1 | NC1255073 | Thaw-Lyse, 1000X Concentrate, 60ml | 1000X Concentrate， 60ml | 680 | smarttube2019 |
LYSE2 | NC1255074 | Lyse Buffer 2, 5X Concentrate, 500ml | 5X Concentrate， 500ml | 1700 | smarttube2019 |
SERT1 | NC1255075 | Processing Inserts, Bag of 100 | Bag of 100 | 2550 | smarttube2019 |
STBLSTORE2-250 | NC1409327 | Stable-Store V2 Buffer, size: 250 ML |
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