熒光底物

基于 ANSN 的熒光底物
的一般結(jié)構(gòu)圖解了基于6-氨基-1-萘磺酰胺 (ANSN) 熒光底物的一般結(jié)構(gòu)。在本化合物家族中，R 1 是三肽，其COOH-末端殘基通常是精氨酸。R2和R3可以是氫、烷基、芳基或環(huán)烷基。虛線表示各種絲氨酸蛋白酶水解的位點。

含有熒光報告基團(tuán) 6-amino-1-naphthalene-sulfonamide (ANSN) 的底物是用于監(jiān)測各種絲氨酸蛋白酶的酶活性的有用化合物 (1-12)。在此類化合物中，ANSN 報告基團(tuán)與短的三肽序列相連（在 R1 位置）。肽序列旨在優(yōu)化酶和底物之間的相互作用。可以添加到 R2 和 R3 位置的其他成分反映了 P' 亞位點位置的變化，并且通常會影響底物的動力學(xué)參數(shù)。作為有效底物的化合物在三肽和 ANSN 基團(tuán)之間水解。一旦從肽部分切下，ANSN 基團(tuán)的相對熒光就會增加約 1000 倍。

下頁確定的動力學(xué)特性將有助于選擇合適的底物。已證明 ANSN 底物對因子 VIIa (1-5,7,9,10,12) 的分析特別有用。盡管單獨(dú)的因子 VIIa 的底物水解速率相對較慢，但當(dāng)組織因子加入分析系統(tǒng)時，幾種化合物（例如化合物 SN-17a）的 kcat 會發(fā)生很大變化。

使用信息：
基于 ANSN 的底物以 DMSO 中的 10mM 儲備溶液形式提供，通?？捎糜诜治?400 nM 至低至 50pM 濃度范圍內(nèi)的酶。ANSN 底物通常以 50 到 100 µM 的最終濃度使用，并且可以在大多數(shù)生理緩沖液（即 TBS、HBS、PBS 等）中稀釋到該最終濃度。反應(yīng)（熒光的相對變化）可以使用標(biāo)準(zhǔn)熒光計或熒光讀板器進(jìn)行監(jiān)測。動力學(xué)或終點模式可與設(shè)置在以下波長（激發(fā)=352nm，發(fā)射=470nm）的儀器一起使用。通過在發(fā)射光束中使用 390 至 450 nm 長通截止濾波器，可以最大限度地減少光偽影。

下表列出了每種底物的動力學(xué)特性，表下方列出了期刊參考文獻(xiàn)列表作為使用示例。

DMSO 中的儲備底物溶液應(yīng)在 4°C 或更低的溫度下冷凍儲存，并應(yīng)避光。在這些條件下，化合物將保持穩(wěn)定超過一年。

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